高考生物一輪復習 第50講 微生物的培養技術及應用（知識清單）

第50講微生物的培養技術及應用1.________________，__________________________是研究和應用微生物的前提，也是發酵工程的重要基礎。在實驗室培養微生物，一方面要為人們需要的微生物提供合適的營養和環境條件；另一方面要確保其他微生物無法混入，并將需要的微生物分離出來。2.培養基（1）培養基的概念：人們按照微生物_____________________，配制出_______________________________。（2）培養基的用途：用以________、________、________、________微生物或________________________。（3）培養基的種類：①按物理性質劃分Ⅰ________培養基：常用于工業生產、微生物的擴大培養；Ⅱ________培養基：常用于微生物的分離與鑒定，活菌計數，保藏菌種，配制時需加入______________。②按化學成分劃分Ⅰ________培養基：（成分明確）將所需的營養物質按種類和所需量嚴格配制而成的培養基。Ⅱ________培養基：（成分不明確）如牛肉膏蛋白胨培養基。③按用途劃分Ⅰ________培養基：___________________________________________________________________________。如，為了篩選出能分解尿素的細菌，可以配制以__________為唯一______源的培養基。為了篩選出能分解纖維素的微生物，可以配制以__________為唯一______源的培養基。為了篩選出自養微生物，可以配制不含______源的培養基。為了篩選出固氮微生物，可以配制不含______源的培養基。在培養基中加入高濃度的NaCl，可以篩選________微生物。在培養基中加入青霉素（只能殺死細菌），可以篩選____________菌在使用選擇培養基時，一般還需要設置兩種對照：一是未接種的相同的培養基，其作用是：________________________________________；二是接種相同菌液的含完全營養的培養基（如牛肉膏蛋白胨培養基），其作用是：__________________Ⅱ________培養基。在培養基中加入特殊化學物質或指示劑，使目的菌的菌落呈現特定顏色或菌落周圍出現圈（透明圈、有顏色圈），從而在多種雜菌中鑒別出目的菌的培養基。加入的物質不會影響微生物的生長。如，在以尿素為唯一氮源的培養基中同時加入__________指示劑，培養某種細菌后，如果尿素被分解，PH將________，指示劑將變_________。在鑒定纖維素分解菌的培養基中加入_________染料，當培養基中的纖維素被分解后，會出現以纖維素分解菌為中心的________，其越大，說明___________________________；（4）雖然各種培養基的配方不同，但一般都含有_______、_______、_______和_______等營養物質。在提供上述幾種主要營養物質的基礎上，培養基還需要滿足微生物生長對_____、_____________以及______的需求。例如，在培養乳酸桿菌時，需要在培養基中添加_______；在培養霉菌時，一般需要將培養基調至_______；在培養細菌時，一般需要將培養基調至__________；在培養厭氧微生物時，需要提供_____的條件。（5）牛肉膏蛋白胨培養基的營養構成培養基組分提供的主要營養牛肉膏蛋白胨NaCl無機鹽H2O水3.無菌技術（1）獲得純凈的微生物培養物的關鍵____________________________。（2）無菌技術應圍繞著如何避免雜菌的污染展開，主要包括________和________。消毒滅菌概念使用____________的物理、化學或生物等方法殺死物體表面或內部__________微生物，不包括_______和________使用____________的理化方法殺死物體內外__________微生物，包括_______和________常用方法________消毒法、________消毒法、________消毒法（如酒精、氯氣）、紫外線消毒法等_________滅菌法、_________滅菌法、_________滅菌法（高壓蒸汽滅菌）適用對象操作空間、液體、雙手等接種環、接種針一般用________滅菌、玻璃器皿一般用________滅菌、培養基只能用__________滅菌（3）巴氏消毒法的優點是：_______________________________________________________________。（4）做好消毒和滅菌工作后，要注意避免已經滅菌處理的材料用具與周圍的物品接觸。為了避免周圍環境中微生物的污染，接下來的許多操作都應在_____________上并在___________________進行。4.微生物的純培養（1）培養物：_______________________________________________________________________________。（2）純培養物：_______________________________________________________________________________。（3）純培養：_______________________________________________________________________________。（4）菌落：_______________________________________________________________________________。（5）微生物的純培養包括____________、_________、_________、_________和_________等步驟。5.酵母菌的純培養（1）制備培養基第一步：配制培養基第二步：滅菌（培養基只能用_________滅菌；培養基必須先調PH再滅菌）第三步：倒平板（待培養基冷卻至______℃左右時，在____________________倒平板；等待培養基冷卻凝固后，將培養皿倒過來放置，目的是_____________________________________________________________）（2）接種和分離酵母菌接種方法一：平板劃線法①平板劃線法的原理：通過_________在固體培養基表面___________的操作，將聚集的菌種逐步_________到培養基的表面。經數次劃線后培養，可以分離得到________。②用途：用于對微生物的純化、鑒定和分離，但是不能用于微生物的________。③操作步驟Ⅰ.在操作的第一步灼燒接種環（是為了避免接種環上可能存在的微生物污染培養基。）Ⅱ.每次劃線之前都要灼燒接種環（是為了殺死上次劃線結束后接種環上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數的增加，使每次劃線時菌種數目逐漸減少，以便得到菌落。）Ⅲ.劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環（能及時殺死接種環上殘留的菌種，避免細菌污染環境和感染操作者。）Ⅳ.在灼燒接種環之后，要等其冷卻后再進行劃線（以避免接種環溫度太高，殺死菌種）Ⅴ.在做第二次以及其后的劃線操作時，要從上一次劃線的末端開始劃線（劃線后，線條末端的細菌數目比起始處要少，每次從上一次的末端開始，能使細菌的數目隨劃線次數的增加而逐漸減少，最終得到單個細菌繁殖而來的菌落。）接種方法二：稀釋涂布平板法①稀釋涂布平板法的原理：當______________________時，培養基表面生長的一個________，來源于樣品稀釋液中的一個___________。通過統計平板上的_________，就能推測出樣品中大約含有多少__________。②用途：用于對微生物的純化、鑒定和分離，也常用來統計樣品中_______的數目。③計數原則：為了保證結果準確，一般選擇菌落數為_____________的平板進行計數。在同一稀釋度下，應至少對3個平板進行重復計數，然后求出平均值。④誤差分析：統計的菌落數往往比活菌的實際數目________，這是因為____________________________________________________________________________________________________________________。因此，統計結果一般用________數而不是用_________數來表示。⑤操作步驟Ⅰ.系列稀釋操作：該操作常用在將細胞接種到培養基之前，通過液體稀釋的方法分散細胞，隨著稀釋程度的增大，單位體積中的微生物細胞數量減少，細胞得以分散。Ⅱ.涂布平板操作步驟：（3）培養酵母菌完成平板劃線后，待菌液被培養基吸收，將接種后的平板和一個__________的平板_________，放入28℃左右（培養溫度因酵母菌種類的不同而稍有差異）的恒溫培養箱中培養24-48h。6.微生物的數量測定方法（1）稀釋涂布平板法——統計出的是樣品中_____菌的數目。（2）顯微鏡直接計數法——統計的結果一般是____________________________。顯微鏡直接計數法本身不能區分細菌的死活，但是通過一定的輔助處理，可以實現活菌計數，如在計數前用臺盼藍染液進行染色，可以通過統計無色細胞的個數來對活菌進行計數。7.土壤中分解尿素的細菌的分離與計數（1）實驗原理：①絕大多數微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成__________的微生物才能分解尿素。②利用__________________________的選擇培養基，可以從土壤中分離出分解尿素的細菌。（2）實驗設計Ⅰ.土壤取樣細菌適宜在酸堿度接近______性的潮濕土壤中生長，絕大多數分布在距地表3-8cm的土壤層。因此，取樣時一般要____________。取土樣時用的鐵鏟和取樣紙袋在使用前都需要_________。Ⅱ.樣品的稀釋Ⅲ.微生物的培養與觀察a.不同種類的微生物，往往需要不同的培養溫度和培養時間。細菌一般在30-37℃的溫度下培養1-2d。b.每隔24h統計一次菌落數目，選取____________________的記錄作為結果。c.一般來說，在相同的培養條件下，同種微生物表現出穩定的菌落特征。菌落特征包括菌落的_________