寵物醫學-實驗室四大基礎檢驗

實驗室四大基礎檢驗一、血液學1.如何制備血涂片2.犬貓正常紅細胞形態及異常形態的認知3.犬貓正常白細胞的形態4.顯微鏡下白細胞的計數制備染色良好的血涂片，是精確分析血象的先決條件。以便于觀察血液細胞的形態及血液原蟲，同時用于制備血涂片的載玻片上雜質直接影響著血涂片的質量。涂片前準備：1.玻片的雜質處理2.染色液的準備（瑞氏或瑞氏-姬姆薩染色液或者diff-quic染色液）3.采集血液（全血或EDTA抗凝血）血涂片的制備涂片前的準備：1.新玻片的清潔:20%的潔廁靈泡一天（至少4-24小時）-清水沖洗-毛巾擦干（紗布）-無水乙醇浸泡24小時(需要封口)-真絲布擦干-晾干或烘干，裝好備用。涂片前的準備2.舊玻片的清潔：洗衣粉水煮開15分鐘，放涼后，清水沖洗干凈，用一塊略濕潤的紗布擰干，內含少許洗衣粉，擦洗玻片，然后清水沖洗干凈，接著重復新玻片清潔法。血涂片的推制1：載玻片的左手持法左手拇指和中指持載玻片血涂片的推制2：滴加血樣：用棉簽（或者蓋玻片、滴管）沾取少量抗凝全血，輕觸載玻片右1/4處，使載玻片上沾上半滴血液.血涂片的推制3：蓋玻片持法右手拇指，中指夾持蓋玻片兩緣，食指輕壓玻片表面，將選好的蓋玻片平滑邊壓在載玻片上血液的前方，兩玻片夾角30°左右，向后拉蓋玻片至接觸血液，待血液擴散成直線。血液粘稠時角度適當減小，否則制備的血片短而厚，貧血時角度稍大。血涂片的推制4：推片右手拇指，食指在夾持蓋玻片的同時，也夾持了載玻片的兩條邊，并以之為軌道前推蓋玻片，直至載玻片的盡頭。血涂片染色制備良好的血涂片應分布均勻，血膜長而薄，呈火焰狀。每個患病動物應制備多個血涂片。紅細胞的正常形態形狀：兩面雙凹的圓盤狀，中央區域呈灰白色，貓中央灰白區域很小，犬：大?。?.0—7.0um；貓：大小5.5-6.0um.多染性紅細胞（藍紅色的未成熟紅細胞）：犬：約占紅細胞總數的1%(附圖片）；貓：約占紅細胞總數的1.5%--2.0%。紅細胞多染性紅細胞（大紅細胞）豪-喬氏小體豪-喬氏小體（howell-jollybodies)是紅細胞內深染的核殘體，正常犬紅細胞內很少含有這些包涵體。多見于巨幼細胞性貧血、溶血性貧血、脾切除后以及缺鐵性貧血等的骨髓及血片貓偶爾可見，比犬多見。紅細胞異常形態1.紅細胞大小不等癥—紅細胞大小不一致（大紅細胞---紅細胞變大；小紅細胞—紅細胞變小）2.多染性紅細胞癥—血涂片上多染性紅細胞的數量增加3.低色素血癥---血紅蛋白含量減少，低色素紅細胞呈現較大的中央灰白區域（附圖）低色素性紅細胞4.棘型紅細胞---紅細胞表面有2—10個鈍長的指狀突起（注意與鋸齒狀紅細胞區分）5.球型紅細胞—小而圓的紅細胞，深染，沒有中央灰白區域。（附圖）6.口型紅細胞---呈杯狀的紅細胞（附圖）

7.海因茨小體---被氧化的血紅蛋白沉淀，通常在紅細胞表面呈鼻狀突起（附圖）棘型紅細胞口型紅細胞球形紅細胞8.偏心紅細胞---血紅蛋白集中與細胞的一極，另一極為未著色區域9.裂紅細胞----形狀不規則，通常成不規則的三角形，為紅細胞碎片.紅細胞碎片，包括盔形紅細胞等，多見于彌散性血管內凝血、微血管病性溶血性貧血和心源性溶血性貧血等紅細胞破碎綜合癥；其它常見于化學中毒、腎功能衰竭、血栓性血小板減少性紫癜。（附圖）10.鋸齒狀紅細胞---邊緣皺褶，拉長的紅細胞（也稱鋸齒狀卵紅細胞）11.靶形紅細胞—形狀似射擊的靶形（附圖）裂紅細胞血涂片中靶形紅細胞出現較多時可能表明存在慢性疾病，包括肝臟疾病和堵塞性黃疸、某些內分泌疾病、鐵缺乏、脾臟切除后以及罕見的卵磷脂-膽固醇酰基轉移酶先天性缺乏。不過，血樣風干過程中處理不當也可產生靶形紅細胞。有核紅細胞——犬貓血液中存在有核紅細胞代表了貧血時未成熟細胞的釋放，偶爾也見于未貧血的動物。（附圖）溶血性疾?。喝拓愇飨x病這是一種由蜱傳播的犬血液原蟲病。巴貝西蟲病可引起真正的血管內溶血性貧血，通常以血紅蛋白血癥和血紅蛋白尿為特征。在外周血液血涂片中，巴貝西蟲以淚滴狀存在于紅細胞內，長約3um,被寄生在紅細胞的巴貝西蟲可達4條之多，其在外周血液中出現也是有周期性的。（附圖）嗜中性粒細胞形態：大小——直徑12-15um，或者是紅細胞直徑的2-2.5倍。細胞核——分葉或者部分分葉，染色質濃密，深紫。細胞質——淡粉色或者淺藍色，含小顆粒，均勻。正常動物的大部分循環嗜中性粒細胞（95%-100%）都是分葉嗜中性粒細胞。桿狀中性粒細胞很少見嗜中性粒細胞嗜中性粒細胞嗜中性粒細胞的功能:主要是防御微生物入侵組織，嗜中性粒細胞可殺死細菌，還能破壞或參與破壞霉菌，藻類以及病毒通過定向轉移或者趨化作用，在炎癥部位或者細菌感染部位聚集犬嗜酸性粒細胞：形態：大小——直徑12-20um與嗜中性粒細胞相似或者稍大。細胞核——分葉或者部分分葉，染色質濃密，深紫細胞質——含有大小和數量不等的圓形橙紅色顆粒，犬嗜酸性粒細胞偶爾也可能含有較大的圓形顆粒，其大小和顏色與紅細胞相似。嗜酸性粒細胞貓嗜酸性粒細胞：大小——直徑12-20um，與嗜中性粒細胞相似或稍大。細胞核——分葉或部分分葉，染色質深紫細胞質——含有大量淡粉色的棒狀顆粒嗜酸性粒細胞功能：是全身過敏反應的一個主要組成部分具有有限的吞噬作用和殺菌活性，在破壞腫瘤細胞中可能起一定作用嗜酸性粒細胞在殺死表面含有lgG或補體的吸蟲和線蟲的過程中也起著重要作用嗜堿性粒細胞犬：大小——直徑12-20m與嗜中粒細胞相似或稍大。細胞核——分葉核細胞質——呈淡紫色或者灰色，含少量散在的深色顆粒，有些細胞顆?？赡芊浅Ｉ伲踔镣耆珱]有。貓嗜堿性粒細胞大小——直徑12-20um，比嗜中性粒細胞稍大。細胞核——分葉核，染色質淡染，均質，與單核細胞的細胞核極為相似。細胞質——含有大量圓形，淡紫色的顆粒肥大細胞大小——與犬貓的嗜堿性粒細胞相似細胞核——圓形至橢圓形，位于細胞質的中央或者一側細胞質——含有大量圓形、深紫色小顆粒，部分顆粒可能部分遮蔽細胞核外周血液中很難見到肥大細胞單核細胞：犬貓單核細胞形態相似大小——15-20um細胞核——形狀不規則，花邊狀網狀染色質細胞質——大量，呈灰色或藍灰色功能——單核細胞/巨噬細胞連續體是循環吞噬系統的第二大分支（嗜中性粒細胞是第一大分支）特異的巨噬細胞功能包括：單核細胞吞噬作用通過釋放炎性介質來調節炎癥反應進行抗原處理以提呈給淋巴細胞；參與激活免疫應答參與調節機體的鐵存儲犬單核細胞淋巴細胞犬貓正常淋巴細胞形態相似大小——9-12um細胞核——圓形，偏于一側，染色質成塊細胞質——缺乏邊緣，淡藍色反應性（抗原刺激性）淋巴細胞受抗原刺激的淋巴細胞也稱為反應性淋巴細胞，免疫細胞或者轉化淋巴母細胞反應性淋巴細胞代表機體對抗原刺激產生了適當反應犬貓反應性淋巴細胞相似反應淋巴細胞之間形態存在很大的差異，但共同點包括：大小——15-20um細胞核——大，網狀染色質，可能存在核仁細胞質——豐富，淡藍至深藍，可能存在蒼白的核周區形狀：盤狀，橢圓形，稍微拉長，兩面稍凹或者是扁平的，邊緣平滑大小：直徑2.2-3.7um，厚0.5um（約是紅細胞大小的1/1o）幼稚血小板通常是巨型血小板，單個血小板是最常見的，也可以觀察到血小板群。血小板貓血小板在形態上與其他動物的血小板相似形狀：小球體，有時會稍顯拉長，容易結成團塊，形成一些無定型的團塊巨型血小板可與紅細胞大小一樣，常見于正常貓血液單個血小板及血小板凝集群（附圖）顯微鏡下的計數鏡檢，分類計數：由于各種白細胞的物理性質稍有不同，他們在血涂片上的分布不均勻，一般在涂片的邊緣和尾部較集中，在中部較稀疏，計數時血涂片應按固定的方向曲折推進（附圖），用白細胞分類計數器計數最少100個白細胞，則各類白細胞的計數值就是其各自的百分含量。糞便的顯微鏡檢消化產物體細胞寄生蟲植物細胞菌類糞便的檢查方法

1.直接涂片法（適合于蟲卵密度較大時）2.懸浮法（a.飽和鹽水浮集b.硫酸鋅溶液）3.沉淀法（適合于比重較大的蟲卵）直接涂片

直接涂片的優勢在于準備時間短，操作過程需要的設備少，其缺點在于少量的糞便可能不足以檢出攜帶量低的寄生蟲，同時載玻片上大量無關的糞便碎片可能與寄生蟲混在一起。直接涂片糞便樣品可通過棉簽沾取或測肛溫的體溫計（在檢測動物體溫后）獲得，無論哪種方法需要很少的糞便。方法：1.在載玻片上滴一滴飽和鹽水或水，再放上等量的糞便。2.用棉簽將糞便和鹽水或水充分混勻，使之成為均與的乳液3.在載玻片上進行涂片，涂層要薄到透過片子看到報紙上的字。4.去掉大塊的糞便，如果需要再加入水，然后蓋上蓋玻片。5.在10倍物鏡下檢查蟲卵和幼蟲或在40倍的物鏡下檢查移動的成蟲。懸浮法1.飽和鹽水懸浮法（較常見）2.硫酸鋅懸浮法原蟲變性性最小，飽和鹽水易腐蝕實驗儀器，形成結晶，并使寄生蟲卵嚴重脫水變形，其能達到的最大比重1.200.使得偏重些的卵沉在下面。

硫酸鋅溶液配制在1L水中邊攪拌邊加入約386g的硫酸鋅，無需加熱，但加熱可快速溶解。懸浮法檢測方法：1.將約2g的糞便放入杯中，加入適量已配制的硫酸鋅溶液，用棉簽攪拌均與，再加滿溶液至杯滿，蓋上蓋玻片，靜置約15分鐘，待檢。2.迅速拿開蓋玻片放在一塊新載玻片上注意防止氣泡過多，至于顯微鏡下10倍鏡檢，同直接涂片法操作。沉淀法這種方法用于檢查重的在懸浮液中不能漂浮的蟲卵或是在懸浮液中容易脫水變形的蟲卵，吸蟲卵很重，不適用漂浮法，一般用沉淀法。方法：1.在杯中將2g糞便與自來水混合，將混合液通過紗布過濾并注入到離心管中至半管。2.用水調節離心管的平衡，離心3-5min,1300-1500rpm。3.慢慢將表面的液體倒出或用吸管吸出丟棄，不能攪亂下層的沉淀。4.用吸管吸取少量細小沉淀置于載玻片上，蓋上蓋玻片在顯微鏡下檢查，檢查方法同直接涂片檢查法。用于常規檢驗的糞便樣品越新鮮越好，在幾個小時內不能檢驗樣品應該放在冰箱內或加入等體積的10%的福爾馬林。糞便樣品要新鮮是由于卵、卵囊和生活周期的其他階段隨時可能因為生長發育而發生改變使診斷變的十分困難。糞便的肉眼檢查：粘稠度：根據動物種類的不同新鮮糞便也具有一定的形態。腹瀉和便秘都可能是寄生蟲感染造成的顏色：糞便顏色受到所吃的食物的影響吸收不良和感染寄生蟲也可能改變糞便的顏色。血液：糞便中存在血液可呈深紅棕色或條紋狀的鮮紅色。出現上述任何一種血便都說明存在嚴重的寄生蟲感染或其他嚴重的腸道疾病。便血是重要的臨床癥狀，代謝后的血液呈深色、焦油狀。消化產物：1、脂肪無色透明或呈淡黃色因表面張力作用通常呈球形。應與氣泡相鑒別。動物攝入普通飲食時糞便不見或少見脂肪滴，如見大量脂滴多屬病態。動物攝入脂肪過多消化吸收不完全糞便也可見較多脂滴。2、肌肉纖維在低倍鏡下呈蠟樣，較鮮明的黃色，形狀不定，消化較充分時，內部結構較均勻，消化不充分時，在高倍鏡下可見內部未消化的肌絲和橫紋。肉食獸類便中有時可見。攝入過多或消化不良時，可大量出現。3、淀粉。顆粒細小，呈球形，有時數個淀粉球聚成團。經碘酒染色呈棕黑色或藍紫色。攝入過多或消化不良時大量出現。部分細胞內也含大量淀粉成分，經碘染色后呈藍紫色。肌纖維體細胞1、紅細胞。紅細胞抵抗力弱，在腸道已被消化、腐敗而破壞。糞便中正常形態的紅細胞可見于后部腸道近期出血，如異物損傷、感染性大腸炎導致的出血等。前部腸道出血，糞便中紅細胞形態常變形，破壞嚴重。2、白細胞。糞便中的白細胞或膿細胞來自腸壁的滲出，常混雜于大量黏液中，聚集成團。低倍鏡觀察又未經碘染色，有時不易被發現。大量白細胞或膿細胞的存在，提示劇烈的腸炎。3、上皮細胞，大而扁平，來自腸壁，腸炎時常與白細胞，膿細胞同時大量存在。寄生蟲寄生蟲可感染動物的口腔，食管，胃，小腸，大腸及其他內部器官，對于這些寄生蟲，可進行糞便采集和顯微鏡檢查，通常在糞便中找到寄生蟲生活周期某個階段的蟲體便可確診。包括：蟲卵、卵囊、幼蟲、節片（絳蟲）和成蟲。1、球蟲原蟲，卵囊呈卵圓型，無色，壁薄而光滑，單層，內有兩個到多個孢子囊；大小為：35~42um-27~33um，寄生在腸道粘膜上皮內。2、滴蟲原蟲，蟲體呈立體的紡錘型或梨型，常有4至6根鞭毛，分別向頭尾兩側伸出。長：9~20um，寬：5~10um，通常沒有包囊階段。在生理鹽水稀釋的樣品中運動活躍，但由于折射率與背景的折射率相似，觀察發現較難，需在高倍鏡下鑒別。3、蛔蟲蛔蟲卵呈球形或橢圓形卵殼厚，多層，外層粗糙，表面凹凸不平，原無色，常被糞便內膽色素染成黃色至棕綠色，卵殼內為球形細顆粒的胚細胞，極少含有粗大顆粒，有時因卵殼厚而不易辨認其內部構造。有時見吐出或隨糞便排出蟲體，蟲長5~18mm，白色線狀。4、鉤蟲卵呈橢圓型，卵殼呈明顯的一層，極薄而透明，無色，內含有多個卵胞，卵殼與卵胞間清晰透明。蟲體白色線狀。5、絳蟲卵囊體積較大，形態特征明顯，易于鑒別。成熟的孕節常隨糞便排出體外，白色乳一小段扁的面條；孕節干燥后狀如白芝麻，常掛于肛門周圍。6、吸蟲吸蟲卵是腸道寄生蟲中最小的蟲卵之一，形狀似橢球形，但一段稍細另一端鈍圓，較細的一段有卵蓋；卵殼較厚，淡棕黃色，外表不很光滑。吸蟲的蟲體半透明，形似螞蝗，兩端均有吸盤。犬球蟲犬弓首蛔蟲“吸金蟲”—華枝睪吸蟲圖1奶牛糞便中的吸蟲卵鉤蟲卵線蟲卵（視頻）絳蟲卵鞭蟲卵植物細胞1、纖毛：存在植物葉片表面，呈線狀中空，基部鈍，末梢尖；表面光滑或有凸起。注意避免誤認為線蟲蟲體。2、木栓細胞：常呈蜂窩狀排列，亦有個別脫落的單個細胞。細胞常呈多邊形，比較厚，內有顆粒。注意與寄生蟲卵相區別。3、植物導管：植物的導管系統多呈螺旋形盤曲，脫落后狀似彈簧，斷裂的導管有時呈環狀。4、花粉：外觀多呈光滑的球形，顏色多樣，其形狀最易與寄生蟲卵混淆，花粉平均直徑比蟲卵小。植物細胞菌類正常的糞便中含有大量的細菌。糞便中的細菌形態、種類多樣，不能單從形態上鑒別。糞便中常含有少量的真菌。消化道內有害真菌數量過多時也可引起腸炎。兔等草食動物由于消化需要含有較大量真菌屬正常。另外動物服用酵母片等微生物制劑后，腸道也可見相應的真菌。鏈格孢霉大腸桿菌病三、尿液檢驗尿液檢驗包括尿常規和尿沉渣。尿沉渣顯微鏡檢查的主要對象有上皮細胞，紅細胞，白細胞，管型，菌類，各種結晶等等，尿沉渣鏡檢中紅細胞，白細胞，腎小管上皮細胞意義較重要。尿液的采集：清潔的容器收集自然排出、尚未落地的尿液，必要時采取導尿管導尿或膀胱穿刺采尿。尿沉渣的制備：取10ML左右的尿液，置離心管中，以1000-2000R/分離心3-5分鐘，用滴管吸出上清液，輕輕晃動離心管，使沉渣均勻混懸于少量剩余尿液中，用滴管吸出滴于載玻片上，加蓋玻片鏡檢。可用碘染液染色。1.紅細胞新鮮尿液中紅細胞的正常形態多為淡黃色圓盤狀，在弱酸性尿中，其形態和顏色可較長時間無改變，在堿性尿中，紅細胞破壞很快。尿紅細胞的出現常并非由于腎小球通透性增加而來，尿路的任何部位（如膀胱、尿道）由于感染，結石等發生損傷，導致局部微血管破裂，均可造成尿中紅細胞的出現。尿紅細胞大量破壞時，血紅蛋白逸出，造成尿蛋白檢測呈陽性，其次，雌性動物發情時，尿中可能帶有從生殖道來的紅細胞。紅細胞2.白細胞正常尿中白細胞多是分葉核粒細胞，一般數量極少，呈散在分布，直徑稍大于紅細胞。膿細胞為白細胞吞噬大量異物后形成，主要為變形的嗜中性細胞。如尿中有大量白細胞或膿細胞，眼觀尿液混濁，靜置后有大量沉淀，表示尿路有劇烈炎癥。在尿中有大量白細胞，蛋白尿增多和腎小管上皮細胞的情況，則為腎炎的象征，下泌尿道發炎時，尿中僅有少來那個白細胞和蛋白質而無腎小管上皮細胞。3.上皮細胞1.腎小管上皮細胞（也稱小圓上皮細胞）來自腎小管，多呈圓形或多角形，比白細胞稍大，含一大而圓的胞核，核位于細胞的中央，細胞漿有顆粒。小圓上皮細胞大量出現，表示腎實質有嚴重疾患，常見于腎小球腎炎，其他能引起腎臟損傷的疾病尿中也可出現腎小管上皮細胞。2.變移上皮細胞也稱大圓上皮細胞，約為白細胞的2-4倍大小，形態不一，可似梨形，梭形，圓形或帶尾形，核呈圓形或卵圓形，來自膀胱、尿道、輸尿管、腎盂、前列腺或精囊腺，在正常尿中不易見到，在發生腎盂、輸尿管、膀胱等的炎癥時刻成片脫落。變移上皮細胞腎小管上皮細胞3.鱗狀上皮細胞（也稱扁平上皮細胞）尿中形態最大的細胞，呈扁平的片狀，似魚鱗，含有小而明顯的圓形或橢圓形核，來自膀胱、尿道及陰道漸層。正常尿中少量存在，膀胱炎時，尿中科出現大量的鱗狀上皮細胞。4.精子正常的精子能活動，外形似蝌蚪，雄性動物及配種后的雌性動物尿液中均可發現。（附圖）鱗狀上皮細胞精子5.管型1.透明管型正常尿中偶見，典型結構為質地均勻，邊緣光滑，呈明顯的圓柱幾乎無色透明，長短不一。2.顆粒管型泌尿系統疾病導致出現的管型中最常見，為透明管型中含有多量顆粒，色澤較透明管型暗，較透明管型短而粗，起顆粒主要由變性蛋白，脂肪微粒構成，均為腎上皮細胞變形的產物。透明管型顆粒管型3.上皮管型為管型中含有腎小管上皮皮細胞4.紅細胞管型為管型中含有紅細胞，說明腎小球或腎小管出血。5.蠟樣管型為腎小管內停留時間久的透明管型所形成。顆粒管型腎上皮管型腎上皮細胞（瑞姬氏染色）6.結晶物尿液中出現結晶稱為結晶尿。結晶尿布一定都有意義。腎功能正常時，可將形成結晶的某些成分排入尿液，從而形成結晶，一些結晶是代謝性疾病的產物，引起尿結晶行成的因素也可引起尿結石的形成，形成結晶的類型取決于尿液的PH值、濃度和溫度，以及尿液成分的溶解度。如果樣品在檢測前放置、冷藏，樣品中的結晶兩將因組成的物質在低溫下溶解度較低而增加，冷藏樣