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PAGEPAGE18第35講細胞工程[考綱明細]1.植物的組織培育(Ⅱ)2.動物細胞培育與體細胞克隆(Ⅱ)3.細胞融合與單克隆抗體(Ⅱ)考點1植物組織培育與植物體細胞雜交1.細胞工程的概念與理論基礎(1)細胞工程①操作水平:eq\o(□,\s\up5(01))細胞水平或細胞器水平。②目的:依據人的意愿來變更細胞內的eq\o(□,\s\up5(02))遺傳物質或獲得eq\o(□,\s\up5(03))細胞產品。(2)植物細胞的全能性①概念:具有某種生物全部eq\o(□,\s\up5(04))遺傳信息的任何一個細胞,都具有發育成eq\o(□,\s\up5(05))完整生物體的潛能。②原理:細胞內含有本物種的eq\o(□,\s\up5(06))全套遺傳信息。③全能性表達條件:具有完整的細胞結構,處于eq\o(□,\s\up5(07))離體狀態,供應肯定的eq\o(□,\s\up5(08))養分、激素和其他相宜外界條件。④細胞全能性大小與細胞分化程度成反比。⑤全能性大小:植物細胞:受精卵>生殖細胞>體細胞動物細胞:受精卵>生殖細胞>體細胞核(動物細胞全能性受限制,但細胞核具有全能性)2.植物組織培育(1)理論基礎:植物細胞的eq\o(□,\s\up5(01))全能性。(2)操作流程①離體的器官、組織或細胞常稱為eq\o(□,\s\up5(02))外植體。②a過程為eq\o(□,\s\up5(03))脫分化,b過程為eq\o(□,\s\up5(04))再分化,A表示eq\o(□,\s\up5(05))愈傷組織,B表示eq\o(□,\s\up5(06))叢芽或胚狀體。3.植物體細胞雜交(1)概念:將不同種的植物體細胞,在肯定條件下融合成雜種細胞,并把雜種細胞培育成eq\o(□,\s\up5(01))新的植物體的技術。(2)原理:體細胞雜交利用了細胞膜的eq\o(□,\s\up5(02))流淌性,雜種細胞培育成雜種植株利用了植物細胞的eq\o(□,\s\up5(03))全能性。(3)過程4.植物細胞工程的實際應用(1)植物繁殖的新途徑①微型繁殖:用于快速繁殖優良品種的植物組織培育技術。特點eq\b\lc\{\rc\(\a\vs4\al\co1(a.保持優良品種的遺傳特性,b.高效快速地實現種苗的大量繁殖))②作物脫毒技術:是選取作物無毒組織(如莖尖)進行組織培育,獲得脫毒苗的技術。③人工種子:以植物組織培育得到的eq\o(□,\s\up5(01))胚狀體、eq\o(□,\s\up5(02))不定芽、eq\o(□,\s\up5(03))頂芽和eq\o(□,\s\up5(04))腋芽等為材料,經過人工薄膜包裝得到的種子。(2)作物新品種的培育①單倍體育種實質:花藥離體培育過程就是植物組織培育過程。優點:后代不發生eq\o(□,\s\up5(06))性狀分別,都是純合子,能夠穩定遺傳,明顯縮短了eq\o(□,\s\up5(07))育種年限。②突變體的利用:在植物組織培育過程中,由于培育細胞始終處于不斷的分生狀態,因此簡單受到培育條件和外界壓力(如射線、化學物質等)的影響而發生突變。從這些產生突變的個體中可以篩選出對人們有用的突變體,進而培育成新品種。(3)細胞產物的工廠化生產①細胞產物:蛋白質、脂肪、糖類、藥物、香料、生物堿等。②培育階段:愈傷組織階段。③技術基礎:植物組織培育技術。1.(選修3P36“小學問”改編)固體培育基中的無機養分成分包括水分、無機鹽;有機養分成分包括小分子糖類、氨基酸等物質。2.(選修3P38思索與探究T1)為什么“番茄—馬鈴薯”超級雜交植株沒有如科學家所想象的那樣地上長番茄、地下結馬鈴薯?提示生物基因的表達不是孤立的,它們之間是相互調控、相互影響的,所以“番茄—馬鈴薯”超級雜種植株的細胞中雖然具備兩個物種的遺傳物質,但這些遺傳物質的表達相互干擾,不能再像番茄或馬鈴薯植株中的遺傳物質一樣有序表達,雜種植株不能地上長番茄、地下結馬鈴薯就是很自然的了。3.(選修3P38思索與探究T2)原生動物眼蟲中含有葉綠體,說明植物細胞的細胞器可以在某些動物細胞存活。據此推想動植物細胞間可以實現雜交嗎?假如可以,設計詳細試驗方案。提示依據眼蟲的特點,動物細胞和植物細胞之間在理論上是可以實現雜交的。詳細的試驗方案如圖所示:4.人工種皮是保證包袱在其中的胚狀體順當生長成小植株的關鍵部分,請探討:人工種皮中應當具有的有效成分是什么?為了促進胚狀體的生長發育,我們還可以向人工種皮中加入哪些物質?提示針對植物種類和土壤等條件,在人工種子的包袱劑中可以加入適量的養分、無機鹽、有機碳源以及農藥、抗生素、有益菌等。為了促進胚狀體的生長發育,還可以向人工種皮中加入一些植物生長調整劑。題組eq\a\vs4\al(一)植物組織培育過程1.(2024·江蘇高考)花藥離體培育是重要的育種手段。下圖是某二倍體植物花藥育種過程的示意圖,下列敘述正確的是()A.為了防止微生物污染,過程①所用的花藥需在70%乙醇中浸泡30minB.過程②的培育基中需添加較高濃度的細胞分裂素以利于根的分化C.過程③逐步分化的植株中可篩選獲得純合的二倍體D.過程④應將煉苗后的植株移栽到含有蔗糖和多種植物激素的基質上答案C解析為了防止微生物污染,過程①所用的花蕾需在70%乙醇中浸泡30s,A錯誤;過程②的培育基中,當生長素與細胞分裂素的比值適中,且生長素含量高于細胞分裂素時,有利于根的分化,B錯誤;進行過程③的愈傷組織經過了秋水仙素的處理,故其分化后的植株中可篩選獲得純合的二倍體,C正確;經煉苗后的幼苗是能進行光合作用且能獨立進行代謝的植株,故幼苗的生長基質中不用添加蔗糖和多種植物激素,D錯誤。2.(2024·海南高考)甲、乙兩名同學分別以某種植物的綠色葉片和白色花瓣為材料,利用植物組織培育技術繁殖該植物?;卮鹣铝袉栴}:(1)以該植物的綠色葉片和白色花瓣作為外植體,在肯定條件下進行組織培育,均能獲得試管苗,其原理是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(2)甲、乙同學在誘導愈傷組織所用的培育基中,均加入肯定量的蔗糖,蔗糖水解后可得到。若要用細胞作為材料進行培育獲得幼苗,該細胞應具備的條件是(填“具有完整的細胞核”“具有葉綠體”或“已轉入抗性基因”)。(3)圖中A、B、C所示的是不同的培育結果,該不同結果的出現主要是由于培育基中兩種激素用量的不同造成的,這兩種激素是。A中的愈傷組織是葉肉細胞經________形成的。(4)若該種植物是一種雜合體的珍貴花卉,要快速獲得與原植株基因型和表現型都相同的該種花卉,可用組織培育方法繁殖,在培育時,________(填“能”或“不能”)采納經減數分裂得到的花粉粒作為外植體,緣由是________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。答案(1)綠色葉片和白色花瓣的細胞具有全能性,在肯定條件下能發育成完整的植株(2)葡萄糖、果糖具有完整的細胞核(3)細胞分裂素、生長素脫分化(4)不能對雜合體的植株來說,由減數分裂形成的花粉粒的基因型與體細胞的基因型不同,用花粉粒進行組織培育得到的花卉基因型不同于原植株解析(1)植物組織培育的原理是植物細胞具有全能性。(2)蔗糖水解后可得到葡萄糖、果糖。用細胞作為材料進行培育獲得幼苗,細胞必需具有完整細胞核,才具有發育為個體的一整套遺傳信息。(3)影響植物組織培育的兩種主要激素是細胞分裂素和生長素。愈傷組織是葉肉細胞經脫分化形成的。(4)由于花粉粒是經減數分裂形成的,其基因型與體細胞的基因型不同,組織培育得到的花卉基因型不同于原植株,導致不能保留親本性狀。題后歸納1.植物組織培育的關鍵(1)條件:離體,肯定養分物質,激素(生長素、細胞分裂素)等。(2)培育基狀態:固體培育基(需再分化生根培育基及生芽培育基)(3)體內細胞未表現全能性的緣由:基因的表達具有選擇性。(4)光照的應用脫分化階段不須要賜予光照,再分化階段須要賜予光照,以利于葉綠素的形成。2.植物激素在植物組織培育中的作用題組eq\a\vs4\al(二)植物體細胞雜交過程3.(2024·南充中學檢測)白菜、甘藍均為二倍體,體細胞染色體數目分別為20、18。“白菜—甘藍”是用細胞工程的方法培育出來的蔬菜新品種,它具有生長期短、耐熱性強和易于貯存等優點。如圖是“白菜—甘藍”的雜交過程示意圖,回答以下問題:(1)為了得到原生質體需先用________和________來處理白菜細胞和甘藍細胞。(2)誘導原生質體融合的方法有多種,常用的物理方法是______________________,融合完成的標記是____________________。由雜種細胞得到白菜—甘藍還須要經過組織培育技術,其中須要避光培育的步驟是____________。(3)如圖通過植物體細胞雜交技術獲得的“白菜—甘藍”體細胞染色體數為________;通常狀況下,白菜和甘藍有性雜交是不能勝利的,緣由是____________________,若對白菜和甘藍采納雜交育種方法能勝利的話,得到的后代應含________條染色體。(4)植物體細胞雜交技術和傳統雜交技術相比的優點是________________________________________________________________________。答案(1)纖維素酶果膠酶(2)離心、振動、電激再生出新的細胞壁脫分化(3)38存在生殖隔離19(4)克服遠緣雜交不親和的障礙,培育作物新品種解析(1)植物細胞壁的主要成分是纖維素和果膠,依據酶的專一性原理,可采納纖維素酶和果膠酶去除植物細胞壁。(2)誘導原生質體融合的方法包括:物理方法(離心、振動、電激)和化學方法(聚乙二醇);融合完成的標記是再生出新的細胞壁;將雜種細胞培育成雜種植株還須要采納植物組織培育技術,包括脫分化和再分化兩個階段,其中脫分化過程要避光,再分化過程需光。(3)如圖通過植物體細胞雜交技術獲得的“白菜—甘藍”體細胞染色體數為20+18=38;通常狀況下,由于白菜和甘藍之間存在生殖隔離,因此白菜和甘藍有性雜交是不能勝利的;若對白菜和甘藍采納雜交育種方法能勝利的話,得到的后代應含eq\f(20,2)+eq\f(18,2)=19條染色體。(4)植物體細胞雜交技術和傳統雜交技術相比的優點是克服遠緣雜交不親和的障礙,培育作物新品種。學問拓展雜種植物遺傳物質的變更(1)遺傳特性:雜種植株中含有兩種植物的遺傳物質,故雜種植株具備兩種植物的遺傳特性。(2)染色體組數①染色體組數=兩種植物體細胞內染色體組數之和。②植物體細胞雜交形成的雜種植株,有幾個染色體組就稱為幾倍體。③若一植物細胞含有2x條染色體,2個染色體組,基因型為Aabb,另一植物細胞含有2y條染色體,2個染色體組,基因型為ccDd,則新植株應為異源四倍體,其體細胞中染色體為(2x+2y)條,4個染色體組,基因型為AabbccDd??键c2動物細胞培育與動物體細胞核移植1.動物細胞培育(1)動物細胞工程常用的技術手段:eq\o(□,\s\up5(01))動物細胞培育、eq\o(□,\s\up5(02))動物細胞核移植、eq\o(□,\s\up5(03))動物細胞融合、eq\o(□,\s\up5(04))生產單克隆抗體等,其中eq\o(□,\s\up5(05))動物細胞培育技術是其他工程技術的基礎。(2)動物細胞培育①原理:eq\o(□,\s\up5(06))細胞增殖。②過程③條件a.無菌、無毒的環境:對eq\o(□,\s\up5(10))培育液和eq\o(□,\s\up5(11))全部培育用具進行eq\o(□,\s\up5(12))無菌處理。通常在細胞培育液中還要添加肯定量的eq\o(□,\s\up5(13))抗生素,其目的是eq\o(□,\s\up5(14))防止培育過程中的污染。此外,應定期更換培育液,目的是eq\o(□,\s\up5(15))防止細胞代謝產物積累對細胞自身造成損害。b.養分:eq\o(□,\s\up5(16))合成培育基中有糖、eq\o(□,\s\up5(17))氨基酸、eq\o(□,\s\up5(18))促生長因子、無機鹽、微量元素等,需加eq\o(□,\s\up5(19))血清、eq\o(□,\s\up5(20))血漿等一些自然成分。c.溫度和pH:哺乳動物相宜溫度為eq\o(□,\s\up5(21))36.5±0.5_℃,pH為eq\o(□,\s\up5(22))7.2~7.4。d.氣體環境:eq\o(□,\s\up5(23))95%的空氣加eq\o(□,\s\up5(24))5%的CO2的混合氣體。CO2的主要作用是eq\o(□,\s\up5(25))維持培育液的pH。④應用a.生產eq\o(□,\s\up5(26))生物制品,如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等。b.應用于eq\o(□,\s\up5(27))基因工程。c.檢測eq\o(□,\s\up5(28))有毒物質,推斷某種物質的毒性;用于eq\o(□,\s\up5(29))生理、病理、藥理等方面的探討。2.動物體細胞核移植技術和克隆動物(1)原理:動物eq\o(□,\s\up5(01))體細胞核具有全能性。(2)過程(3)結果:eq\o(□,\s\up5(06))產生新個體。(4)應用①加速家畜eq\o(□,\s\up5(07))遺傳改良進程,促進優良畜群繁育;②愛護eq\o(□,\s\up5(08))瀕危物種;③生產醫用蛋白;④作為異種移植的eq\o(□,\s\up5(09))供體;⑤用于組織器官的eq\o(□,\s\up5(10))移植。1.(選修3P49探討T1改編)進行核移植時,為什么要選用去核的MⅡ期的卵母細胞?提示去核目的是使核移植后得到的胚胎或動物的主要遺傳物質全部來自有重要利用價值的動物供應的體細胞;核移植時選MⅡ期卵母細胞的緣由有:①此類細胞體積大,易于操作;②卵黃多,可為胚胎發育供應足夠的養分;③卵母細胞的細胞質中存在激發細胞核全能性表達的物質。2.(選修3P49探討T2)用于核移植的供體細胞一般都選用傳代10代以內的細胞,想一想,這是為什么?提示培育的動物細胞一般當傳代至10~50代左右時,部分細胞核型可能會發生變更,其細胞遺傳物質可能會發生突變,而10代以內的細胞一般能保持正常的二倍體核型。因此,在體細胞核移植中,為了保證供體細胞正常的遺傳基礎,通常采納傳代10代以內的細胞。3.(選修3P49探討T3)用體細胞核移植的方法生產的克隆動物,是對體細胞供體動物進行了100%復制嗎?為什么?提示不是??寺游锝^大部分DNA來自于供體細胞核,但其核外還有少量的DNA,即線粒體中的DNA來自于受體卵母細胞。所以,用教材中所述的方法生產的克隆動物不是對體細胞供體動物進行的100%的復制。此外,即便動物的遺傳基礎完全相同,但動物的一些行為、習性的形成與所處環境有很大關系,體細胞供體動物生活的環境與克隆動物所生活的環境不會完全相同,其形成的行為、習性也不行能和體細胞供體動物完全相同,從這一角度看,克隆動物也不會是對體細胞供體動物100%的復制。4.(選修3P44旁欄思索)用胰蛋白酶分散細胞,說明細胞間的物質主要是什么?用胃蛋白酶行嗎?提示用胰蛋白酶分散細胞,說明細胞間的物質主要是蛋白質。胃蛋白酶作用的相宜pH約為2,當pH大于6時,胃蛋白酶就會失去活性。多數動物細胞培育的相宜pH為7.2~7.4,胃蛋白酶在此環境中沒有活性。5.(選修3P44尋根問底改編)胰蛋白酶處理動物組織,會把細胞消化掉嗎?為什么?提示短時間內不會被消化,緣由是細胞表面具有糖蛋白,對細胞具有肯定的愛護作用。長時間后細胞會被消化,緣由是細胞表面糖蛋白的愛護作用是有限的;細胞膜的主要成分包括磷脂和蛋白質,蛋白質可被胰蛋白酶水解。6.(選修3P50思索與探究T2)動物細胞培育需不須要經過脫分化過程,又為什么呢?提示動物細胞培育不用經過脫分化過程。因為高度分化的動物細胞發育潛能變小,失去了發育成完整個體的實力,因此,進行動物細胞培育不以形成完整個體為目的,沒有類似于植物組織培育時的脫分化過程。題組eq\a\vs4\al(一)動物細胞培育過程1.某探討小組為測定某種藥物對體外培育細胞的毒性,打算對某種動物的肝腫瘤細胞(甲)和正常肝細胞(乙)進行動物細胞培育。下列敘述正確的是()A.制備肝細胞懸液時,可用胃蛋白酶處理肝組織塊B.恒溫培育箱中的CO2濃度維持在5%左右,以促進細胞呼吸C.為了保證細胞培育所需的無毒環境,需大量添加各種抗生素D.本試驗應設置比照試驗,以檢測藥物對甲、乙細胞的毒性大小答案D解析在利用肝組織塊制備肝細胞懸液時,常用胰蛋白酶,不能運用胃蛋白酶,因為胃蛋白酶須要在強酸環境下才能起作用,但這樣的環境不適于細胞生存,A錯誤;細胞培育應在含5%CO2的恒溫培育箱中進行,CO2的作用是維持培育液的pH,B錯誤;抗生素是用來殺菌的,大量添加對細胞有害,C錯誤;本試驗應設置比照試驗,用添加藥物的培育液分別培育甲、乙細胞,依據死亡細胞占培育細胞的比例,以檢測藥物對甲、乙的毒性大小,D正確。2.下列有關動物細胞培育的敘述,錯誤的是()A.惡性腫瘤細胞系具有不死性和失去接觸抑制等特性B.利用液體培育基和CO2培育箱,模擬動物體的內環境C.因細胞具有相互依存關系,細胞克隆需飼養細胞支持生長D.細胞株沒有差異性,在連續傳代過程中遺傳性狀始終保持穩定答案D解析惡性腫瘤細胞系能無限繁殖,細胞表面糖蛋白削減,細胞之間的黏著性降低,即具有不死性和失去接觸抑制等特性,A正確;動物細胞培育時模擬動物體的內環境,須要液體培育基(糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等,還需加入血清、血漿等自然物質)和CO2培育箱(95%空氣和5%的CO2),B正確;飼養細胞為動物細胞培育供應分化抑制因子,維持分裂狀態,做為細胞分裂增殖的養分細胞,C正確;細胞株傳到50左右不能再接著傳代,部分細胞遺傳物質變更,具有癌變細胞的特點,可以在培育條件下無限制的傳代下去,D錯誤。題組eq\a\vs4\al(二)動物體細胞核移植3.下列關于動物體細胞核移植技術和克隆動物的敘述,正確的是()A.目前在試驗中,科學家可以用類似植物組織培育的方法獲得完整的動物個體B.體細胞的細胞核移植到受體細胞之前,要先去掉受體卵母細胞的核C.用于核移植的供體細胞一般都選用傳代50代以內的細胞D.用體細胞核移植方法生產的克隆動物是對體細胞供體動物進行100%的復制答案B解析目前在試驗中,科學家還不行以干脆把動物細胞培育成完整的動物個體,A錯誤;用于核移植的供體細胞一般都選用傳代10代以內的細胞,因為10代內的細胞能保持正常的二倍體核型,C錯誤;用體細胞核移植方法生產的克隆動物,并沒有對體細胞供體動物進行100%的復制,因為還有部分遺傳物質來自受體卵母細胞的細胞質,并且生物的性狀還受環境影響,D錯誤。4.(2024·全國卷Ⅲ)2024年《細胞》期刊報道,中國科學家領先勝利地應用體細胞對非人靈長類動物進行克隆,獲得兩只克隆猴——“中中”和“華華”。回答下列問題:(1)“中中”和“華華”的獲得涉及核移植過程,核移植是指__________________________________________。通過核移植方法獲得的克隆猴,與核供體相比,克隆猴體細胞的染色體數目__________(填“減半”“加倍”或“不變”)。(2)哺乳動物的核移植可以分為胚胎細胞核移植和體細胞核移植,胚胎細胞核移植獲得克隆動物的難度__________(填“大于”或“小于”)體細胞核移植,其緣由是____________________________________。(3)在哺乳動物核移植的過程中,若分別以雌性個體和雄性個體的體細胞作為核供體,通常,所得到的兩個克隆動物體細胞的常染色體數目________(填“相同”或“不相同”),性染色體組合________(填“相同”或“不相同”)。答案(1)將動物的一個細胞的細胞核,移入一個已去掉細胞核的卵母細胞中,使其重組并發育成一個新的胚胎,這個新的胚胎最終發育為動物個體不變(2)小于胚胎細胞分化程度低,復原全能性相對簡單(3)相同不相同解析(1)核移植是指將動物的一個細胞的細胞核,移入一個已經去掉細胞核的卵母細胞中,使其重組并發育成一個新的胚胎,這個胚胎最終發育成為動物個體。通過核移植方法獲得的克隆猴的細胞核來自供體,因此克隆猴體細胞的染色體數目和供體一樣。(2)胚胎細胞核移植的難度小于體細胞核移植,其緣由是動物胚胎細胞分化程度低,復原其全能性相對簡單。(3)哺乳動物雌性個體和雄性個體的體細胞染色體中常染色體數目相同,性染色體前者是XX,后者是XY,因此分別以雌性個體和雄性個體的體細胞作為核供體,通常所得到的兩個克隆動物體細胞的常染色體數目相同,性染色體組合不同。題后歸納細胞核移植中的遺傳物質及工程技術1.克隆動物是由重組的細胞經培育而來的,該重組細胞的細胞質基因來源于受體細胞,細胞核基因來源于供應細胞核的親本,其遺傳物質來自2個親本。2.動物體細胞核移植技術(克隆)從生殖方式的角度看屬于無性生殖,須要動物細胞培育和胚胎工程技術的支持??键c3動物細胞融合與單克隆抗體的制備1.動物細胞融合(1)原理:eq\o(□,\s\up5(01))細胞膜具有肯定的流淌性。(2)方法:eq\o(□,\s\up5(02))物理法(離心、振動、電激)、化學法(PEG)和生物法(滅活病毒處理)。(3)結果:形成雜交細胞。(4)意義:克服了eq\o(□,\s\up5(03))遠緣雜交不親和的障礙。(5)應用:制備單克隆抗體。2.單克隆抗體制備(1)血清抗體與單克隆抗體(2)過程(3)單克隆抗體的應用①作為診斷試劑:能精確識別各種抗原物質的微小差異,并與肯定抗原發生特異性結合,具有精確、高效、簡易、快速的優點。②用于治療疾病和運載藥物:主要用于癌癥治療,可制成“生物導彈”,也有少量用于治療其他疾病。(選修3P52生物技術資料卡)滅活病毒誘導細胞融合的原理是什么?其中的“滅活”的概念是什么?提示滅活病毒誘導細胞融合的原理是:病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細胞膜上的糖蛋白發生作用,使細胞相互凝合,細胞膜上的蛋白質分子和脂質分子重新排布,細胞膜打開,細胞發生融合。滅活是指用物理或化學手段使病毒或細菌失去感染實力,但是并不破壞這些病原體的抗原結構。題組eq\a\vs4\al(一)動物細胞融合過程分析1.(2024·吉林長白山質檢)Ⅱ型糖尿病病因困難,多數是胰島素拮抗引起機體對胰島素的敏感性降低,而胰島素單克隆抗體可用于快速檢測血清胰島素的含量。請回答下列有關胰島素單克隆抗體制備的問題:(1)首先須要將人胰島素注射到健康成熟小鼠體內,其目的是獲得________________細胞;再將該細胞與____________相融合,以制取雜交瘤細胞;其中誘導融合的常用生物誘導因素是______________。(2)細胞融合試驗完成后,融合體系中除含有未融合的細胞和雜交瘤細胞外,可能還有__________________________等融合細胞。細胞融合過程體現了細胞膜具有________的特性。(3)為檢驗得到的雜交瘤細胞能否分泌胰島素抗體,可用________與從雜交瘤細胞培育液中提取的抗體雜交。在體外條件下,當培育的小鼠雜交瘤細胞達到肯定密度時,需進行________培育以得到更多數量的細胞。(4)細胞融合技術的優點是____________________________。答案(1)能分泌抗人胰島素抗體的B小鼠骨髓瘤細胞滅活的病毒(2)B細胞相互融合形成的細胞、骨髓瘤細胞相互融合形成的細胞流淌性(3)人胰島素傳代(4)突破了有性雜交的局限,使遠緣雜交成為可能解析(1)為了獲得能分泌抗人胰島素抗體的B淋巴細胞,應當將人的胰島素作為抗原注射到小鼠體內;雜交瘤細胞是由該B淋巴細胞與骨髓瘤細胞誘導融合形成的,常用的生物誘導劑是滅活的病毒,此外也可以用物理或化學方法進行誘導。(2)若只考慮兩兩融合的狀況,假如體系中存在三種融合細胞,即雜交瘤細胞、B細胞相互融合形成的細胞、骨髓瘤細胞相互融合形成的細胞;兩種細胞能夠相互融合利用了細胞膜的流淌性。(3)檢測雜交瘤細胞產生的胰島素抗體可以用抗原—抗體雜交法,即用人的胰島素與從雜交瘤細胞培育液中提取的抗體雜交。小鼠雜交瘤細胞的培育屬于動物細胞培育技術,當細胞數量太多時,須要進行分瓶傳代培育,才能獲得更多的雜交瘤細胞,進而獲得更多的單克隆抗體。(4)動物細胞融合技術可以讓不同的細胞相互融合,突破了有性雜交的局限,使遠緣雜交成為可能。
題后歸納動物細胞融合與植物體細胞雜交的比較(1)融合前的處理不同:植物體細胞雜交用纖維素酶和果膠酶去掉細胞壁,制備原生質體才能融合,而動物細胞可以干脆融合。(2)誘導方式不同:相比植物體細胞雜交,動物細胞融合特有的誘導方式是用滅活的病毒處理。(3)目的不同:植物體細胞雜交的目的是為了培育雜種植株;動物細胞融合只是為了獲得雜種細胞。題組eq\a\vs4\al(二)單克隆抗體制備過程的考查2.對于下面制備單克隆抗體過程示意圖,不正確的敘述是()A.①表示B淋巴細胞和骨髓瘤細胞,均是從小鼠的脾臟中提取的B.④中的篩選是通過抗原—抗體反應進行的C.②促進細胞融合的方法可以利用聚乙二醇作介導D.⑤可以無限增殖答案A解析單克隆抗體是利用B淋巴細胞(漿細胞)和小鼠骨髓瘤細胞融合得到,融合方法可以是化學方法如聚乙二醇,也可以是生物方法如滅活病毒,C正確;假如要篩選產特異性抗體的雜交細胞可以通過抗原—抗體反應,假如有反應說明表達了抗體,B正確;融合細胞具有雙親特點,既能無限增殖又能產生特異性抗體,D正確;骨髓瘤細胞從骨髓中提取,A錯誤。3.(2024·黑龍江大慶二模)近年來很多試驗資料顯示,人乳頭狀瘤病毒(HPV)在宮頸癌發生過程中可能起了更重要的作用??笻PV的單克隆抗體可以精確檢測出HPV,從而剛好監控宮頸癌的發生,以下是以HPV衣殼蛋白為抗原制備出單克隆抗體的過程。請據圖回答下列問題:(1)將特定的抗原注入小鼠的目的是______________。上述單克隆抗體制備過程中涉及的細胞工程技術有____________________________。(2)在HAT培育基上存活的細胞可能包括________(填下列序號)①無抗體分泌的細胞②抗HPV抗體的分泌細胞③其他無關抗體的分泌細胞,但能生長的只有________,該細胞的特點是________________________________。(3)科學家從某些無限增殖細胞的細胞質中分別出了無限增殖的調控基因(prG),該基因能激發動物細胞分裂,這為單克隆抗體的制備供應了更多的思路:通過基因工程向________(細胞)中導入prG,還可以利用________技術,將漿細胞的細胞核移植到去核的________中。答案(1)刺激小鼠產生免疫反應(獲得能分泌特定抗體的漿細胞)動物細胞培育、動物細胞融合(2)①②③雜交瘤細胞既能快速大量繁殖,又能產生專一的抗體(3)漿細胞(體細胞)核移植無限增殖的細胞(或骨髓瘤細胞)解析(1)將特定的抗原注入小鼠,刺激小鼠產生免疫反應,使B細胞增殖分化成能分泌特定抗體的漿細胞和記憶細胞;單克隆抗體制備過程中要將淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合為雜交瘤細胞,為動物細胞融合技術,要培育雜交瘤細胞,為動物細胞培育技術。(2)看圖分析可知:小鼠骨髓瘤細胞不能在HAT培育基上生長,但是沒有說能不能生存,只是不能增殖,正常細胞也能在HAT培育基上存活,故①無抗體分泌的細胞、②抗HPV抗體的分泌細胞、③其他無關抗體的分泌細胞都能在HAT培育基上存活,但是能夠增殖的只有雜交瘤細胞,它的特點是既能快速大量繁殖,又能產生專一的抗體。(3)據題意,可以通過基因工程向漿細胞的細胞核染色體DNA中導入prG,也可以利用體細胞核移植技術,提取該漿細胞的細胞核,和去核的無限增殖細胞(或骨髓瘤細胞)融合為重組細胞,進行細胞培育產生單克隆抗體。題后歸納制備單克隆抗體過程中兩次篩選的方法及目的高考熱點突破1.(2024·江蘇高考)(多選)如圖為細胞融合的示意圖,下列敘述正確的是()A.若a細胞和b細胞是植物細胞,需先去分化再誘導融合B.a細胞和b細胞之間的融合須要促融處理后才能實現C.c細胞的形成與a、b細胞膜的流淌性都有關D.c細胞將同時表達a細胞和b細胞中的全部基因答案BC解析植物細胞壁會阻礙細胞融合,故植物細胞融合前需先用酶解法除去細胞壁,A錯誤;細胞間的融合需在相應的誘導處理下才能完成(如離心、聚乙二醇等,動物細胞還可用滅活病毒誘導融合),B正確;細胞融合過程出現了膜的變形,故細胞融合過程與細胞膜流淌性有關,C正確;
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