DB13-T2828-2018-馬鈴薯抗旱性鑒定技術(shù)規(guī)程-河北省

ICS65.020.20DB13B05河北省地方標(biāo)準(zhǔn)DB13/T2828—2018馬鈴薯抗旱性鑒定技術(shù)規(guī)程河北省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布DB13/T2828—2018前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由河北北方學(xué)院提出。本標(biāo)準(zhǔn)由河北北方學(xué)院起草。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人員：王燕、王寬、羅亞婷、郭三妮、王磊、馮琰、吳桂麗、祁利潘、劉暢、孫明磊、李夢(mèng)、蘇云、柴瑩、尹江、龔學(xué)臣。IDB13/T2828—2018馬鈴薯抗旱性鑒定技術(shù)規(guī)程12范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了馬鈴薯抗旱性鑒定方法及使用規(guī)則。本標(biāo)準(zhǔn)適用于馬鈴薯品種、種質(zhì)資源的抗旱性鑒定。規(guī)范性引用文件下列文件中對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB18133馬鈴薯種薯DB13/T865-2007馬鈴薯有機(jī)栽培技術(shù)規(guī)程3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。抗旱指數(shù)droughtresistanceindex（DRI）抗旱指數(shù)是指抗旱系數(shù)與某材料旱地產(chǎn)量之積，再除以所有材料的平均旱地產(chǎn)量。gradeofdroughtresistance抗旱性分五級(jí)，從強(qiáng)到弱依次為：1級(jí)，極強(qiáng)（HR，highlyresistant）；2級(jí)，強(qiáng)（R，resistant）；3級(jí)，中等（MR，middleresistant）；4級(jí)，弱（S，susceptible）；5級(jí)，極弱（HS，highlysusceptible）。4馬鈴薯抗旱性鑒定時(shí)期分為苗期和全生育期兩個(gè)時(shí)期，可根據(jù)工作目的，選用不同時(shí)期的鑒定結(jié)1DB13/T2828—2018種薯質(zhì)量應(yīng)符合GB18133的要求。為減少種薯差異，先將塊莖放于18℃條件下催芽，待芽長(zhǎng)1cm左右，按單芽切塊，每個(gè)切塊重相等（7g±0.5g），備用。4.1.2播種將準(zhǔn)備好的芽塊播種于口直徑15cm的塑料盆中，盆中用透水性好的沙壤土（也可以用水洗沙），播后統(tǒng)一灌溉，出苗后，每盆只留1個(gè)莖，每個(gè)材料種植20株，3次重復(fù)。4.1.3干旱脅迫處理干旱處理材料在出苗后40d停止灌水7～8片葉，使土壤水分保持在田間最大持水量的30%±3%，處理72h后采集樣品。4.1.4非干旱脅迫處理正常供水材料按植株正常生長(zhǎng)需要，給以充足水分，使土壤水分保持在田間最大持水量55%±5%。4.1.5樣品采集干旱脅迫處理組脅迫72h后取處理組和對(duì)照組主莖中上部功能葉片1～2片置于冷藏箱內(nèi)帶回實(shí)驗(yàn)室備用。4.1.6測(cè)定指標(biāo)和方法馬鈴薯生理生化指標(biāo)的測(cè)定按照常規(guī)植物生理生化指標(biāo)的測(cè)定方法。葉綠素含量測(cè)定（SPAD502葉綠素儀測(cè)定）；首先用（1）式求每材料各指標(biāo)的抗旱系數(shù)，用（2）式或（3）式求每個(gè)材料各指標(biāo)的具體隸屬函數(shù)值，用（4）式求每材料的平均隸屬函數(shù)值:抗旱系數(shù)DRC=干旱處理測(cè)定值/對(duì)照測(cè)定值………………（1）Uij=(Xij-Xmin)/(Xmax-Xmin)……………（2）或Uij=1-(Xij-Xmin)/(Xmax-Xmin)……………（3）nUij……………（4）Uij——i材料j指標(biāo)的隸屬函數(shù)值；Xij——為i材料j指標(biāo)的抗旱系數(shù)；Xmax——為所有材料中此指標(biāo)的最大值；Xmin——為所有材料中此指標(biāo)的最小值；Ui——為i材料各性狀的平均抗旱隸屬函數(shù)值。注：葉綠素、過(guò)氧化氫和過(guò)氧化物等指標(biāo)的隸屬函數(shù)值計(jì)算用(2)式，丙二醛指標(biāo)的隸屬函數(shù)值計(jì)算用(3)式。2DB13/T2828—20184.1.8苗期抗旱性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)馬鈴薯苗期抗旱性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合表1。表1馬鈴薯苗期抗旱性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別平均抗旱隸屬函數(shù)值(Ui)Ui≥0.63抗旱性極強(qiáng)（HR）強(qiáng)（R）123450.53≤Ui<0.630.37≤Ui<0.530.28≤Ui<0.37Ui<0.28中等（MR）弱（S）極弱（HS）4.2全生育期抗旱性鑒定馬鈴薯全生育期抗旱性鑒定在旱棚內(nèi)進(jìn)行。4.2.1種薯要求同4.1.1。4.2.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)旱棚內(nèi)用塑料布深埋1米，把旱棚面積分成相等的兩區(qū)域，一區(qū)域用于正常澆水材料種植，一區(qū)域用于干旱脅迫處理材料種植。每區(qū)域內(nèi)部材料隨機(jī)排列，三次重復(fù)。干旱處理區(qū)播種后少量灌水，確保苗全苗齊。出苗后至收獲不供水。對(duì)照試驗(yàn)的土壤狀況與脅迫處理的基本一致，保證馬鈴薯全生育期處于水分適宜狀態(tài)。其它管理與脅迫處理一致。YDYD………………（5）nY3DB13/T2828—2018式中：DRI——抗旱指數(shù)；YD——干旱脅迫處理產(chǎn)量（kg）；YW——對(duì)照處理產(chǎn)量（kg）；j——第j個(gè)參試品種（系）。4.2.8全生育期抗旱性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)馬鈴薯全生育期抗旱性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)見表2。表2馬鈴薯全生育期抗旱性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別抗旱指數(shù)（DRI）DRI≥1.41抗旱性極強(qiáng)（HR）強(qiáng)（R）123451.03≤DRI<1.410.51≤DRI<1.030.14≤DRI<0.51DRI≤0.14中等（MR）弱（S）極弱（HS）5以育種和生產(chǎn)應(yīng)用為目的馬鈴薯抗旱性鑒定，應(yīng)采用全生育期抗旱性鑒定的方法。以快速篩選遺傳和生理方面為目的馬鈴薯抗旱性鑒定，應(yīng)采用苗期抗旱性鑒定的方法。_________________________________4DB13/T2828—2018AA附錄A（規(guī)范性附錄）過(guò)氧化物酶（POD）活性測(cè)定A.1試劑A.1.1試劑a)磷酸氫二鈉；b)c)磷酸二氫鈉；愈創(chuàng)木酚；d)H2O2。A.1.2試劑配制A液：0.2mol/LNa2HPO4，（Na2HPO4·2H2O35.61g或53.65gNa2HPO4·7H2O或71.7gNa2HPO4·12H2O用蒸餾水配成1000ml）B液：0.2mol/LNaH2PO4，（27.6gNaH2PO4·H2O用蒸餾水配成1000ml）31.2gNaH2PO4·2H2O磷酸緩沖液(pH6.0，0.1mol/L)：A：B=12.3:87.7，混勻稀釋至200ml磷酸緩沖液(pH7.8，0.05mol/L)：A：B=91.5:8.5，混勻稀釋至400ml稱取樣品0.5g，加入2m1磷酸緩沖液(pH7.8，0.05mol/L)，冰浴研磨，再以3m1磷酸緩沖液分兩次沖洗殘?jiān)徊⑥D(zhuǎn)入10ml離心管中。0-4℃低溫，12000rpm離心20min，離心后冷藏保存，酶液供丙二醛、POD、CAT測(cè)定用。反應(yīng)混合液配制：0.lmol/L磷酸緩沖液(pH6.0)100m1，愈創(chuàng)木酚56μl，加熱攪拌至溶解，測(cè)定：取50μl酶液，加入3m1反應(yīng)混合液，以50μl磷酸緩沖液(pH7.8)代替酶液作為空白，470nm比色并計(jì)時(shí)，每隔lmin讀一次(讀0，1，2min的OD值)，以每分鐘內(nèi)OD470變化值表示酶活性大小。5DB13/T2828—2018A.3.2.3結(jié)果計(jì)算：POD活性(U.min-l.g-1FW)=△A470×Vt/0.01×W×Vs×t。式中，△A470：反應(yīng)時(shí)間內(nèi)吸光值的變化；Vt：提取酶液總體積(ml)；W：樣品鮮重（g）；Vs：測(cè)定時(shí)取用酶液體積(ml)；t：反應(yīng)時(shí)間(min)；0.01：每分鐘增加0.01為一個(gè)酶活單位。6DB13/T2828—2018BB附錄B（規(guī)范性附錄）過(guò)氧化氫酶（CAT）活性B.1試劑B.1.1試劑a)磷酸氫二鈉；b)磷酸二氫鈉；c)H2O2。B.1.2試劑配制a)A液：0.2mol/LNa2HPO4，（Na2HPO4·2H2O35.61g或53.65gNa2HPO4·7H2O或71.7gNa2HPO4·12H2O用蒸餾水配成1000ml）b)B液：0.2mol/LNaH2PO4，（27.6gNaH2PO4·H2O用蒸餾水配成1000ml）31.2gNaH2PO4·2H2O磷酸緩沖液(pH7.8，0.05mol/L)：A：B=91.5:8.5，混勻稀釋至400ml磷酸緩沖液(pH7.0，0.05mol/L)，A：B=61.0:39.0，混勻稀釋至400ml過(guò)氧化氫酶（CAT）活性的測(cè)定反應(yīng)混合液配制：0.05mol/L磷酸緩沖液(pH7.0)100m1，30%H2O2100μl，冰箱保存。測(cè)定：取50μl酶液，加入反應(yīng)混合液3m1，用50μl磷酸緩沖液（pH7.8)代替酶液作為空白，-l-1結(jié)果計(jì)算：CAT活性(U.min.gFW)=△A240×Vt/0.1×W×Vs×t式中，△A240：反應(yīng)時(shí)間內(nèi)吸光值的變化；Vt：提取酶液總體積(ml)；W：樣品鮮重（g）；Vs：測(cè)定時(shí)取用酶液體積(ml)；t：反應(yīng)時(shí)間(min)；0.01：每分鐘下降0.1為一個(gè)酶活單位。7DB13/T2828—2018CC附錄C（規(guī)范性附錄）丙二醛（MDA）含量測(cè)定C.1試劑C.1.1試劑a)磷酸氫二鈉；b)c)d)磷酸二氫鈉；硫代巴比妥酸（TBA）；三氯乙酸（TCA）；e)NaOH。C.1.2試劑配制a)A液：0.2mol/LNa2HPO4，（Na2HPO4·2H2O35.61g或53.65gNa2HPO4·7H2O或71.7gNa2HPO4·12H2O用蒸餾水配成1000ml）b)B液：0.2mol/LNaH2PO4，（27.6gNaH2PO4·H2O用蒸餾水配成1000ml）31.2gNaH2PO4·2H2O磷酸緩沖液(pH7.8，0.05mo